- 干货！新型猪繁殖与呼吸综合征病毒株的，鉴定与分离！ - 猪病预
- 发布时间：2019-09-27 14:13 浏览：加载中
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引言
猪繁殖与呼吸综合征病毒（PRRSV）是猪繁殖与呼吸综合征（PRRS）的致病因子，由类似NADC30的PRRSV株引起的疾病暴发在中国引起极大关注。在本研究中，从中国北方的仔猪肺组织中分离出两个新出现的PRRSV菌株，分别命名为PRRSV-ZDXYL-China-2018-1和PRRSV-ZDXYL-China-2018-2菌株。分离的病毒属于基因型2 PRRSV的谱系1，与开放阅读框（ORF5）限制性片段长度多态性（RFLP）1-7-4的US株密切相关。从患病断奶仔猪群中鉴定出两株菌，PRRSV-ZDXYL-China-2018-1和PRRSV-ZDXYL-China-2018-2菌株的完整基因组分别长为15093nt和15110nt，与在美国分离ISU10和NADC34菌株分别具有96.7％-97.0％和97.1％-97.4％的相似性。我们的研究结果表明，中国出现了ORF5 RFLP 1-7-4-like PRRSVs，这可能对PRRSV预防构成巨大挑战。
材料与方法
从中国黑龙江省采集感染断奶仔猪群（4至8周龄）30份肺组织样本。将样品进行RNA提取，反转录cDNA，利用RT-PCR技术鉴定并测序[9]。用于扩增ORF5的引物是正向的：5'-CTGTGCTATCATTGCAGAAGTCGT-3'和反向：5'-TGGCAATTTGAATGTTCAAGTATG-3'。检测PRRSV阳性组织样本的猪圆环病毒2（PCV2），Torque teno sus病毒（TTSuV1-2），猪细小病毒（PPV6.7），经典猪瘟病毒（CSFV）和伪狂犬病病毒（PRV）。如前所述分离PRRSV-ZDXYL-China-2018-1菌株，第三代分离菌株（PRRSV-ZDXYL-China-2018-1菌株）经间接免疫荧光验证正确[1]。在该研究中获得了两个PRRSV完整基因组序列，和来自NCBI GenBank的PRRSV的GP5基因组用于比对和系统发育分析。使用邻接方法进行完整PRRSV基因组的系统发生分析。
结果与讨论
我们首次报道了两株与ORF5 RFLP 1-7-4菌株的出现密切相关的PRRSV新菌株在黑龙江省。从病猪的肺组织中分离和鉴定出PRRSV-ZDXYL-China-2018-1菌株和PRRSV-ZDXYL-China-2018-2菌株。我们确定了PRRSV-ZDXYL-China-2018-1和PRRSV-ZDXYL-China-2018-2菌株的GP5序列显示突变的B细胞表位，T细胞表位，信号肽和外病毒粒子，跨膜（TM）和病毒粒子内域以及初级中和表位（PNE）[2]，它们不仅与标准菌株IA / 2015 / ISU-10（MF326997）和IA / 2014 / NADC34（MF326985）不同位置的突变，而且与中国发现的菌株液有显着差异[3]。 Nsp2蛋白和ORF5 RFLP 1-7-4模式中的缺失可用作分子标记，以鉴定来自中国其他谱系1 PRRSV的1-7-4分离株。应进一步开展研究，如疾病预防，致病性和流行病学研究，以深入了解中国的ORF5 RFLP 1-7-4-like PRRSVs。
